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臺式低速冷凍離心機提取細胞質和細胞核蛋白離心詳細步驟

時間:2021-09-08 | 來源:四川蜀科儀器有限公司
        臺式低速冷凍離心機,轉速一般不超過4000r/min,最大容量為2~4L,是實驗室于大量初級分離提取生物大分子、沉淀物等。其轉頭多用鋁合金制的甩平式和角式兩種,離心管有硬質玻璃、聚乙烯硬塑料和不銹鋼管多種型號。離心機裝配有驅動電機、定時器、調整器(速度指示)和制冷系統(溫度可調范圍為-20~+40℃),可根據離心物質所需,更換不同容量和不同型號轉速的轉頭。
  臺式低速冷凍離心機提取細胞質和細胞核蛋白離心詳細步驟:
  1.決定細胞生長狀態,細胞生長狀態應該是80%或者更好:
  2.用離心機以1500r/min離心5min
  3.棄上清液,用等體積的冷PBS洗細胞,像步驟2那樣,反復3次
  4.根據估計的沉淀量加入5倍體積的isotoniclysisbuffer到細胞顆粒中,使細胞溫和懸浮,盡量避免泡沫
  5.加入裂解液lysisbuffer在懸浮的細胞中,并放在冰上15min讓細胞膨脹,可以通過顯微鏡檢查
  6.對于細胞實驗中膨脹的細胞,加入10%的IGEPALCA-630使最后的濃度達到0.3%,混勻,加的時候要溫和
  7.立即離心(量大的可以用1.5ml的EP管,以5500r/min離心30s;量大的可以用50ml的管子以5500r/min離心2min)
  8.轉移上清液(細胞質蛋白)到一個新的冷凍管中
  9.用懸浮顆粒5倍體積的isotoniclysisbuffer懸浮細胞,并混勻
  10.用離心機離心細胞懸浮液,以1500r/min離心5min,移掉上清液
  11.用2/3倍體積的extractionbuffer懸浮顆粒
  12.把管子放置在震蕩混勻器上,以700r/min,15min震蕩混勻,接著以1400r/min,15min,整個過程要仔細,避免泡沫產生
  13.以9400r/min離心15min,低溫離心完后轉移上清液到一個新的冷凍離心管中
  14.分成幾份用液氮冷凍,并且保存起來(長期保存應放在-80℃上,短期保存要放在-20℃上)
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